브래드포드 시약 (Bradford Reagent)
쉽게 풀면
브래드포드 정량법은 특수한 파란색 색소가 단백질, 특히 염기성 아미노산과 결합하면 색이 짙은 파란색으로 변하는 성질을 이용한다. 색이 변하는 정도가 단백질 양에 비례하기 때문에 흡광도만 측정하면 빠르게 단백질 농도를 알아낼 수 있다. BCA 정량법보다 반응 시간이 짧고 절차가 간단해 신속하게 결과를 얻고 싶을 때 자주 선택된다. 다만 단백질 종류에 따라 결합하는 정도가 달라 정량 오차가 생길 수 있고, 세제 성분에 비교적 민감하다는 단점이 있다.
왜 중요한가
단백질 정량은 웨스턴 블롯, 효소 활성 측정, 세포 배양 실험 등 대부분의 분자생물학·생화학 연구에서 시료 간 로딩량을 맞추기 위한 선행 단계다. 정량이 부정확하면 이후 실험 결과 전체의 재현성과 비교 가능성이 흔들리기 때문에, 브래드포드 정량법처럼 간편하고 빠른 방법은 실험 프로토콜의 표준 절차로 논문 방법론(Methods) 섹션에 자주 등장한다. 특히 시료 수가 많거나 반응 시간을 짧게 유지해야 하는 실험에서는 BCA 등 다른 정량법 대비 실용적인 대안으로 선택되는 경우가 많다.
논문에서는 이렇게 쓰입니다
단백질 시료의 농도를 빠르게 측정하기 위해 사용한 정량 방법을 설명하는 문장이다.
세포 배양 연구에서 표준 곡선을 만들기 위해 BSA를 기준 물질로 사용했음을 밝히는 문장이다.
단백질 정제 및 발현 연구에서 정량 결과를 전기영동 분석과 함께 교차 검증했음을 설명하는 문장이다.
조금 더 깊게 보면
브래드포드 정량법의 원리는 쿠마시 브릴리언트 블루 G-250 색소가 산성 조건에서 단백질의 아르기닌 등 염기성·소수성 아미노산 잔기와 결합하면서 흡수 최대 파장이 465 nm에서 595 nm 부근으로 이동하는 현상에 기반한다. 이 때문에 결과값은 사용한 표준 단백질(흔히 BSA)의 아미노산 조성에 따라 달라질 수 있어, 시료 단백질과 표준물질의 조성 차이가 클 경우 정량 오차의 원인이 된다. 또한 SDS 같은 이온성 세제나 강알칼리성 완충액은 발색 반응을 방해할 수 있어, 이런 성분이 포함된 시료에서는 BCA 정량법이나 로우리(Lowry)법 등 대안적 방법이 함께 언급되기도 한다.
주의할 점
세제 성분이 포함된 시료에서는 발색 반응이 왜곡될 수 있어 BCA 정량법 등 대체 방법을 고려해야 한다.