실시간PCR 정량분석 (Real-Time PCR Quantification)
한 줄 정의: 증폭 과정 중 실시간으로 형광 신호를 측정하여 시료에 포함된 인간 DNA의 양을 정량하는 기법으로, STR 분석 전 시료의 적정 투입량을 결정하는 데 사용됩니다.
쉽게 풀면
요리를 하기 전에 재료의 양을 정확히 재는 것처럼, DNA 분석에 앞서 시료에 DNA가 얼마나 들어있는지 미리 알아야 다음 단계에서 적절한 양을 사용할 수 있습니다. 실시간PCR 정량분석은 DNA가 증폭되는 과정에서 나오는 형광 신호의 세기를 실시간으로 추적하여, 시료 속 인간 DNA의 농도를 계산해주는 기법입니다.
왜 중요한가
STR 증폭에 투입되는 DNA 양이 너무 적거나 많으면 결과 프로필의 품질이 떨어지기 때문에, 정량분석은 신뢰할 수 있는 STR 프로필을 얻기 위한 필수 전 단계로서 법유전학 연구와 실무에서 다루어집니다.
논문에서는 이렇게 쓰입니다
"본 연구에서는 실시간PCR 정량분석 결과를 바탕으로 STR 증폭에 투입되는 DNA 양을 표준화하여 피크 신호의 균일성을 높였다."
정량 결과를 후속 증폭 단계에 반영한 절차를 설명합니다.
"미량 시료의 경우 실시간PCR 정량분석에서 남성 특이 표지자와 총 인간 DNA량의 비율을 함께 산출하여 남녀 혼합 여부를 사전에 파악하였다."
정량 단계에서 시료의 성별 구성을 추정한 사례입니다.
조금 더 깊게 보면
일반적으로 형광 프로브나 인터칼레이팅 염료를 이용해 매 증폭 주기마다 신호를 측정하고, 표준농도 시료로 작성한 검량선과 대조하여 미지 시료의 농도를 산출합니다. 남성 시료의 경우 총 인간 DNA와 별도로 Y염색체 특이 표지자를 함께 정량하는 키트가 흔히 사용됩니다.
주의할 점
정량 결과는 시료의 전체 상태를 완전히 대변하지는 않으며, 억제물질의 존재나 DNA 손상 정도는 별도의 내부대조군 결과와 함께 종합적으로 판단해야 합니다.