트립판 블루 배제법 (Trypan Blue Exclusion Assay)
쉽게 풀면
트립판 블루라는 파란색 염색약은 분자 크기가 커서 정상적인 세포막을 통과하지 못한다. 하지만 죽은 세포는 세포막이 손상되어 있어 이 염색약이 세포 안으로 들어가 세포 전체가 파랗게 물든다. 반대로 살아있는 건강한 세포는 염색약을 막아내 원래의 투명한 색을 그대로 유지한다. 이 색 차이를 현미경으로 눈으로 구분해가며 살아있는 세포와 죽은 세포의 비율을 계산하면 시료의 생존율을 알 수 있다.
왜 중요한가
세포 생존율은 세포 배양, 독성 평가, 약물 반응 실험 등 실험세포생물학 전반에서 실험 결과의 해석 기반이 되는 기초 지표입니다. 처리군과 대조군의 생존율을 비교하는 과정이 논문의 핵심 결과로 이어지는 경우가 많아, 이를 어떤 방법으로 측정했는지가 실험의 신뢰성을 뒷받침하는 근거로 자주 명시됩니다.
논문에서는 이렇게 쓰입니다
파랗게 염색된 죽은 세포와 염색되지 않은 살아있는 세포의 비율을 세어 생존율을 계산했다는 뜻이다.
독성평가나 약리학 연구에서 특정 약물 처리가 세포 생존에 미치는 영향을 이 방법으로 확인했다는 의미다.
세포 배양 실무에서 다음 계대를 위한 세포 수를 정확히 맞추기 위해 이 방법을 사용했다는 뜻이다.
조금 더 깊게 보면
이 방법은 육안 계수에 의존하기 때문에 관찰자 간 편차가 생길 수 있어, 최근에는 자동 세포계수기를 이용해 일관성을 높이는 경우가 많습니다. 또한 트립판 블루는 세포막 손상 여부만 확인할 뿐 세포 사멸 초기 단계(예: 아폽토시스 초기)는 놓칠 수 있어, 더 정밀한 생존율 평가가 필요할 때는 플로우 사이토메트리 기반의 형광 염색법을 함께 사용하기도 합니다.
주의할 점
보통 혈구계산판이나 자동 세포계수기와 함께 사용되어 세포 수 계수와 생존율 판별을 동시에 수행하는 경우가 많다.